Produse
Kit de detectare Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR pentru 2019-nCoV
Utilizare așteptată
Acest kit este utilizat pentru detectarea calitativă a noului coronavirus (2019-nCoV) folosind tampoane pentru gât, tampoane nazofaringiene, lichid de lavaj bronhoalveolar, spută. Rezultatul detectării acestui produs este doar pentru referință clinică și nu trebuie utilizat ca unic. dovezi pentru diagnosticul clinic și tratamentul.Se recomandă o analiză cuprinzătoare a stării în combinație cu manifestările clinice ale pacientului și alte teste de laborator.
Principiul inspectiei
Setul se bazează pe tehnologia RT-PCR într-un singur pas.De fapt, noul coronavirus din 2019 (2019-nCoV) ORF1ab și genele N au fost selectate ca regiuni țintă de amplificare.Primerii specifici și sondele fluorescente (sondele genei N sunt etichetate cu FAM și sondele ORF1ab sunt etichetate cu HEX) sunt proiectate pentru a detecta ARN de coronavirus de tip nou 2019 în probe.Setul include, de asemenea, un sistem de detecție de control intern endogen (sondă genică de control intern etichetată cu CY5) pentru a monitoriza procesul de colectare a probelor, amplificarea ARN și PCR, reducând astfel rezultatele fals negative.
Componentele principale
| Componente | Volum（48T/Kit） |
| Soluție de reacție RT-PCR | 96 pl |
| Primer nCOV TaqMan probemixture (ORF1ab, gena N, gena RnaseP) | 864 pl |
| Control negativ | 1500µl |
| Control pozitiv nCOV（l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
Reactivi proprii: reactivi de extracție sau purificare ARN.Control negativ/pozitiv: controlul pozitiv este ARN care conține fragmentul țintă, în timp ce controlul negativ este apă fără acid nucleic.În timpul utilizării, acestea ar trebui să participe la extracție și ar trebui să fie considerate infecțioase.Acestea trebuie manipulate și eliminate în conformitate cu reglementările relevante.
Gena de referință internă este gena RnaseP umană.
Condiții de păstrare și data de expirare
-20±5℃, evitați înghețarea și decongelarea repetate de mai mult de 5 ori, valabil 6 luni.
Instrument aplicabil
Cu FAM / HEX / CY5 și alt instrument PCR fluorescent multicanal.
Cerințe de specimen
1. Tipuri de specimene aplicabile: tampoane pentru gât, tampoane nazofaringiene, lichid de lavaj bronhoalveolar, spută.
2.Colectarea probelor (tehnică aseptică)
Tampon faringian: Ștergeți amigdalele și peretele posterior al faringianului cu două tampoane în același timp, apoi scufundați capul tamponului într-o eprubetă care conține soluția de prelevare.
Spută: După ce pacientul are o tuse profundă, colectați sputa tuse într-o eprubetă cu capac filetat care conține soluția de prelevare;Lichid de lavaj bronhoalveolar: Prelevare de probe de către profesioniști medicali.3.Depozitarea și transportul probelor
Specimenele pentru izolarea virusului și testarea ARN-ului trebuie testate cât mai curând posibil.Specimenele care pot fi detectate în 24 de ore pot fi păstrate la 4℃;cele care nu pot fi detectate în 24
ore ar trebui depozitate la -70℃ sau mai jos (dacă nu există o condiție de depozitare de -70℃, acestea ar trebui să fie
depozitat temporar la -20℃ la frigider).Specimenele trebuie să evite înghețarea și dezghețarea repetată în timpul transportului.Probelele trebuie trimise la laborator cât mai curând posibil după colectare.Dacă probele trebuie transportate pe distanțe lungi, se recomandă depozitarea cu gheață carbonică.
Metode de testare
1 Procesarea probei și extracția ARN (zona de procesare a probei)
Se recomandă prelevarea a 200μl de probă lichidă pentru extracția ARN.Pentru etapele de extracție aferente, consultați instrucțiunile truselor comerciale de extracție a ARN.Atât negativul, cât și negativul
controalele din acest kit au fost implicate în extracție.
2 Prepararea reactivului PCR (zona de preparare a reactivului)
2.1 Scoateți toate componentele din kit și dezghețați și amestecați la temperatura camerei.Centrifugați la 8.000 rpm câteva secunde înainte de utilizare;calculați cantitatea necesară de reactivi, iar sistemul de reacție este pregătit așa cum se arată în următorul tabel:
| Componente | N porție (sistem 25µl) |
| Primer nCOV amestec de probe TaqMan | 18 µl × N |
| Soluție de reacție RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = numărul de probe testate + 1 (martor negativ) + 1 (nCOVcontrol pozitiv) | |
2.2 După amestecarea completă a componentelor, centrifugați pentru o perioadă scurtă de timp pentru a lăsa tot lichidul de pe peretele tubului să cadă pe fundul tubului, apoi alicoți sistemul de amplificare de 20 µl în tubul PCR.
3 Prelevare de probe (zona de pregătire a probei)
Adăugați 5 μl de controale negative și pozitive după extracție.ARN-ul probei de testat este adăugat în tubul de reacție PCR.
Închideți bine tubul și centrifugați la 8.000 rpm timp de câteva secunde înainte de a-l transfera în zona de detectare a amplificării.
4 Amplificare PCR (zonă de detecție amplificată)
4.1 Așezați tubul de reacție în celula de probă a instrumentului și setați parametrii după cum urmează:
| etapă | Ciclu număr | Temperatura(°C) | Timp | Colectiesite-ul |
| Versotranscriere | 1 | 42 | 10 minute | - |
| Pre-denaturaren | 1 | 95 | 1 min | - |
| Ciclu | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30 de ani | colectare de date |
Selectarea canalului de detectare a instrumentului: Selectați canalul FAM、HEX、CY5 pentru semnalul de fluorescență.Pentru referință fluorescent NIMIC, vă rugăm să nu alegeți ROX.
5 Analiza rezultatelor (Vă rugăm să consultați instrucțiunile experimentale ale fiecărui instrument pentru setare)
După reacție, salvați rezultatele.După analiză, ajustați valoarea de pornire, valoarea finală și valoarea de prag a liniei de bază în funcție de imagine (utilizatorul se poate ajusta în funcție de situația actuală, valoarea de pornire poate fi setată la 3 ~ 15, valoarea finală poate fi setată la 5~20, ajustare) în graficul logaritmic La pragul ferestrei, linia pragului se află în faza logaritmică, iar curba de amplificare a controlului negativ este o linie dreaptă sau sub linia pragului).
6 Control de calitate（În test este inclus un control procedural） Control negativ: Fără curbă de amplificare evidentă pentru canalele de detecție FAM, HEX, CY5n
Control pozitiv COV: curba de amplificare evidentă a canalelor de detecție FAM și HEX, valoarea Ct≤32, dar nicio curbă de amplificare a canalului CY5;
Cerințele de mai sus trebuie îndeplinite simultan în același experiment;în caz contrar, experimentul este invalid și trebuie repetat.
7 Determinarea rezultatelor.
7.1 Dacă nu există o curbă de amplificare sau o valoare Ct> 40 în canalele FAM și HEX ale probei de testat și există o curbă de amplificare în canalul CY5, se poate aprecia că nu există un nou coronavirus 2019 (2019-nCoV) ARN în probă;
.2 Dacă proba de testat are curbe evidente de amplificare în canalele FAM și HEX, iar valoarea Ct este ≤40, se poate aprecia că proba este pozitivă pentru noul coronavirus 2019 (2019-nCoV).
7.3 Dacă proba de testare are o curbă de amplificare clară doar într-un canal de FAM sau HEX, iar valoarea Ct este ≤40 și nu există nicio curbă de amplificare în celălalt canal, rezultatele trebuie să fie retestate.Dacă rezultatele retestării sunt consecvente, eșantionul poate fi considerat pozitiv pentru nou
coronavirus 2019 (2019-nCoV).Dacă rezultatul retestării este negativ, se poate aprecia că eșantionul este negativ pentru noul coronavirus 2019 (2019-nCoV).
Valoarea judecății pozitive
Metoda curbei ROC este utilizată pentru a determina valoarea de referință CT a kitului, iar valoarea de referință de control intern este 40.
Interpretarea rezultatelor testelor
1. Fiecare experiment ar trebui testat pentru controale negative și pozitive.Rezultatele testelor pot fi determinate numai atunci când controalele îndeplinesc cerințele de control al calității
2. Când canalele de detectare FAM și HEX sunt pozitive, rezultatul de la canalul CY5 (canal de control intern) poate fi negativ din cauza concurenței sistemului.
3. Când rezultatul controlului intern este negativ, dacă canalele de detectare FAM și HEX ale eprubetei sunt de asemenea negative, înseamnă că sistemul este dezactivat sau că funcționarea este greșită, testul este invalid.Prin urmare, probele trebuie retestate.
