Produse
Kit de detectare Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR pentru 2019-nCoV
Utilizare așteptată
Acest kit este utilizat pentru detectarea calitativă a noului coronavirus (2019-nCoV) folosind tampoane faringiene, tampoane nazofaringiene, lichid de lavaj bronhoalveolar și spută. Rezultatul detectării acestui produs este doar pentru referință clinică și nu trebuie utilizat ca unică dovadă pentru diagnosticul și tratamentul clinic. Se recomandă o analiză cuprinzătoare a afecțiunii în combinație cu manifestările clinice ale pacientului și alte teste de laborator.
Principiul inspecției
Kitul se bazează pe tehnologia RT-PCR într-o singură etapă. De fapt, genele ORF1ab și N ale noului coronavirus din 2019 (2019-nCoV) au fost selectate ca regiuni țintă de amplificare. Primeri specifici și sonde fluorescente (sondele genei N sunt marcate cu FAM, iar sondele ORF1ab sunt marcate cu HEX) sunt concepute pentru a detecta ARN-ul noului coronavirus de tip 2019 în probe. Kitul include, de asemenea, un sistem endogen de detectare a controlului intern (sondă genică de control intern marcată cu CY5) pentru a monitoriza procesul de colectare a probelor, amplificarea ARN-ului și PCR, reducând astfel rezultatele fals negative.
Componente principale
| Componente | Volum(48T/Kit） |
| Soluție de reacție RT-PCR | 96µl |
| Primer nCOV TaqMan probemixture (ORF1ab, gena N, gena RnaseP) | 864µl |
| Control negativ | 1500µl |
| Control pozitiv nCOV（l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
Reactivi proprii: Reactivi de extracție sau purificare a ARN-ului. Control negativ/pozitiv: Controlul pozitiv este ARN-ul care conține fragmentul țintă, în timp ce controlul negativ este apă fără acid nucleic. În timpul utilizării, acestea trebuie să participe la extracție și trebuie considerate infecțioase. Trebuie manipulate și eliminate în conformitate cu reglementările relevante.
Gena de referință internă este gena RnaseP umană.
Condiții de depozitare și data de expirare
-20±5℃, evitați congelarea și decongelarea repetată de mai mult de 5 ori, valabil 6 luni.
Instrument aplicabil
Cu FAM / HEX / CY5 și alte instrumente PCR fluorescente multicanal.
Cerințe privind specimenele
1. Tipuri de probe aplicabile: tampoane faringiene, tampoane nazofaringiene, lichid de lavaj bronhoalveolar, spută.
2. Colectarea probelor (tehnică aseptică)
Bețișor faringian: Ștergeți amigdalele și peretele faringian posterior cu două bețișoare simultan, apoi introduceți capul bețișorului într-o eprubetă care conține soluția de prelevare.
Spută: După ce pacientul are o tuse profundă, sputa expectorată se colectează într-o eprubetă cu capac cu filet care conține soluția de prelevare; lichid de lavaj bronhoalveolar: Prelevarea probelor se face de către profesioniștii medicali. 3. Depozitarea și transportul probelor
Probele pentru izolarea virusului și testarea ARN-ului trebuie testate cât mai curând posibil. Probele care pot fi detectate în 24 de ore pot fi păstrate la 4℃; cele care nu pot fi detectate în 24 de ore
ore ar trebui depozitate la -70℃ sau mai puțin (dacă nu există condiții de depozitare de -70℃, acestea ar trebui depozitate
(depozitate temporar la -20℃ (frigider). Probele trebuie evitate congelarea și decongelarea repetate în timpul transportului. Probele trebuie trimise la laborator cât mai curând posibil după recoltare. Dacă probele trebuie transportate pe distanțe lungi, se recomandă depozitarea în gheață carbonică.
Metode de testare
1 Prelucrarea probelor și extracția ARN-ului (zona de procesare a probelor)
Se recomandă prelevarea a 200 μl de probă lichidă pentru extracția ARN-ului. Pentru etapele de extracție aferente, consultați instrucțiunile kiturilor de extracție ARN comerciale. Atât probele negative, cât și cele negative
Controalele din acest kit au fost implicate în extracție.
2 Prepararea reactivilor PCR (zona de preparare a reactivilor)
2.1 Scoateți toate componentele din kit, decongelați și amestecați la temperatura camerei. Centrifugați la 8.000 rpm timp de câteva secunde înainte de utilizare; calculați cantitatea necesară de reactivi și preparați sistemul de reacție conform tabelului următor:
| Componente | Porție N (sistem de 25 µl) |
| Primer nCOV amestec de probe TaqMan | 18 µl × N |
| Soluție de reacție RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = numărul de probe testate + 1 (control negativ) + 1 (nCOV)control pozitiv) | |
2.2 După amestecarea completă a componentelor, centrifugați pentru o perioadă scurtă de timp pentru a permite ca tot lichidul de pe peretele tubului să cadă pe fundul acestuia, apoi introduceți o alicotă din sistemul de amplificare de 20 µl în tubul PCR.
3 Eșantionare (zona de pregătire a probelor)
Se adaugă 5 μl de controale negative și pozitive după extracție. ARN-ul probei care urmează să fie testată se adaugă în tubul de reacție PCR.
Închideți ermetic tubul și centrifugați la 8.000 rpm timp de câteva secunde înainte de a-l transfera în zona de detectare a amplificării.
4 Amplificare PCR (zonă de detecție amplificată)
4.1 Plasați tubul de reacție în celula de probă a instrumentului și setați parametrii după cum urmează:
| etapă | Ciclu număr | Temperatură(°C) | Timp | colectaresite |
| Versotranscriere | 1 | 42 | 10 minute | - |
| Pre-denaturaren | 1 | 95 | 1 minut | - |
| Ciclu | 45 | 95 | 15 secunde | - |
| 60 | 30 de ani | colectarea datelor |
Selectarea canalului de detectare a instrumentului: Selectați canalele FAM, HEX, CY5 pentru semnalul fluorescent. Pentru fluorescență de referință NONE, vă rugăm să nu alegeți ROX.
5 Analiza rezultatelor (Vă rugăm să consultați instrucțiunile experimentale ale fiecărui instrument pentru setare)
După reacție, salvați rezultatele. După analiză, ajustați valoarea inițială, valoarea finală și valoarea prag a liniei de bază în funcție de imagine (utilizatorul poate ajusta în funcție de situația reală, valoarea inițială poate fi setată la 3~15, valoarea finală poate fi setată la 5~20) în graficul logaritmic. La pragul ferestrei, linia de prag este în faza logaritmică, iar curba de amplificare a controlului negativ este o linie dreaptă sau sub linia de prag.
6 Control calitativ (Un control procedural este inclus în test) Control negativ: Nu există o curbă de amplificare evidentă pentru canalele de detecție FAM, HEX, CY5
Control pozitiv COV: curbă de amplificare evidentă a canalelor de detecție FAM și HEX, valoare Ct ≤32, dar nicio curbă de amplificare a canalului CY5;
Cerințele de mai sus trebuie îndeplinite simultan în același experiment; în caz contrar, experimentul este invalid și trebuie repetat.
7 Determinarea rezultatelor.
7.1 Dacă nu există o curbă de amplificare sau o valoare Ct > 40 în canalele FAM și HEX ale probei de testare și există o curbă de amplificare în canalul CY5, se poate considera că nu există ARN al noului coronavirus 2019 (2019-nCoV) în probă;
.2 Dacă proba de testare prezintă curbe de amplificare evidente în canalele FAM și HEX, iar valoarea Ct este ≤40, se poate considera că proba este pozitivă pentru noul coronavirus 2019 (2019-nCoV).
7.3 Dacă proba de testare are o curbă de amplificare clară doar într-un canal FAM sau HEX, iar valoarea Ct este ≤40 și nu există o curbă de amplificare în celălalt canal, rezultatele trebuie testate din nou. Dacă rezultatele retestului sunt consistente, proba poate fi considerată pozitivă pentru noul test.
coronavirus 2019 (2019-nCoV). Dacă rezultatul retestului este negativ, se poate considera că proba este negativă pentru noul coronavirus 2019 (2019-nCoV).
Valoarea judecății pozitive
Metoda curbei ROC este utilizată pentru a determina valoarea CT de referință a kitului, iar valoarea de referință a controlului intern este 40.
Interpretarea rezultatelor testelor
1. Fiecare experiment trebuie testat pentru controale negative și pozitive. Rezultatele testelor pot fi determinate numai atunci când controalele îndeplinesc cerințele de control al calității.
2. Când canalele de detecție FAM și HEX sunt pozitive, rezultatul de la canalul CY5 (canalul de control intern) poate fi negativ din cauza concurenței din sistem.
3. Când rezultatul controlului intern este negativ, dacă și canalele de detecție FAM și HEX ale eprubetei sunt negative, înseamnă că sistemul este dezactivat sau funcționarea este greșită, testul este invalid. Prin urmare, probele trebuie testate din nou.
